1、范圍

 

    本文件規定了食品中32種禁用水溶性合成色素（見(jiàn)附錄A）的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本文件適用于飲料、葡萄酒、糖果、調味醬、豆制品、熟肉等食品中32種禁用水溶性合成色素的測定。

 

2、規范性引用文件

 

    下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

 

    GB/T6682分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法

 

    GB/T33087儀器分析用高純水規格及試驗方法

 

3、術(shù)語(yǔ)

 

    和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

4、原理

 

    試樣經(jīng)甲醇溶解定容或5%氨水-甲醇溶液提取，提取液經(jīng)氮吹置換溶劑后，經(jīng)C18萃取小管凈化，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標法定量。

 

5、試劑和材料

 

    除另有說(shuō)明，本實(shí)驗使用試劑均為分析純，水為GB/T6682中規定的一級水或GB/T33087中規定的高純水。

 

5.1  試劑

 

5.1.1  甲醇（CH3OH）：色譜純。

 

5.1.2  乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。

 

5.1.3  氨水（NH3·H2O）：含量20%～25%

 

5.1.4  5%氨水甲醇溶液：移取5mL氨水于100mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度。

 

5.1.5  10%甲醇水溶液：移取10mL甲醇于100mL容量瓶中，用水定容至刻度。

 

5.2  標準品32種禁用水溶性合成色素標準品：參見(jiàn)附錄B，純度≥95%。

 

5.3  標準溶液配制

 

5.3.1  標準儲備溶液（1000mg/L）：分別準確稱(chēng)取經(jīng)折算相當于50mg（精確到0.1mg）的色素標準品，置50mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6個(gè)月。

 

5.3.2  混合標準儲備液A組（10mg/L）：根據附錄A化合物的濃度分組，準確移取1mL的A組色素單標儲備溶液于100mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下保存，保存期3個(gè)月。

 

5.3.3  混合標準儲備液B組（100mg/L）：根據附錄A化合物的濃度分組，準確移取1mL的B組色素單標儲備溶液于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。在—18°C下避光保存，保存期6個(gè)月。

 

5.3.4  混合標準中間液A組（1mg/L）：準確移取1mL混合標準儲備液A組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現配。

 

5.3.5  混合標準中間液B組（10mg/L）：準確移取1mL混合標準儲備液B組于10mL容量瓶中，用甲醇定容到刻度。臨用現配。

 

5.3.6  混合標準工作溶液：根據需要，用10%甲醇水溶液將混合標準中間液稀釋成所需的標準工作溶液。

 

5.4  材料

 

5.4.1  十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18材料）：粒徑40μm～60μm。

 

5.4.2  親水聚四氟乙烯微孔濾膜：0.22μm。

 

6、儀器和設備

 

6.1  液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（LC-MS/MS）：配有電噴霧電離源（ESI）。

 

6.2  分析天平：感量為0.1mg、0.01g。

 

6.3  離心機：轉速不低于8000r/min。

 

6.4  超聲波清洗器。

 

6.5  氮吹儀。

 

7、分析步驟

 

 

 

7.1  試樣制備飲料、葡萄酒、調味醬試樣應混合均勻，含氣飲料及葡萄酒試樣應先加熱或超聲去除二氧化碳后混合均勻，糖果、豆制品、熟肉試樣經(jīng)食品粉碎機攪碎混勻，制備好的試樣密封冷藏避光保存，備用。

 

7.2  試樣提取

 

7.2.1  飲料、葡萄酒試樣稱(chēng)取試樣1g（準確至0.01g）于10mL比色管，用甲醇定容至刻度。準確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測。

 

7.2.2  糖果試樣糖果：稱(chēng)取試樣2g（準確至0.01g）于小燒杯中，加入5mL甲醇，微熱溶解后，溶液轉移至10mL比色管，用甲醇多次洗滌燒杯，洗液合并至比色管，然后定容至刻度。準確移取2mL至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測。其他：

 

7.2.3  調味醬、豆制品、熟肉試樣稱(chēng)取試樣2g（準確至0.01g）試樣于50mL離心管中，加入10mL5%氨水甲醇溶液，超聲5min，在8000r/min下離心5min，重復提取一遍，合并上清液。準確移取2mL上清液于氮吹儀上氮吹至干，用2mL甲醇復溶，轉移至含有50mgC18材料的凈化管中，渦旋1min，在8000r/min下離心5min。取1mL上清液用水定容至10mL，過(guò)0.22μmPTFE濾膜，待測。每個(gè)樣品做2個(gè)平行測試，同時(shí)做空白測試。

 

7.3  儀器參考條件

 

7.3.1  液相色譜參考條件

 

    a)色譜柱：C18柱，100mm×2.1mm，1.8μm，或同等性能的色譜柱；

 

    b)流動(dòng)相：A為5mmol/L乙酸銨水溶液，B為甲醇；梯度洗脫條件見(jiàn)表1；

 

    c)柱溫：40°C；

 

    d)進(jìn)樣量：2μL；

 

    e)流速：0.4mL/min。

 

附錄A

（資料性）

表A.1禁用水溶性合成色素的母離子、子離子、去簇電壓、碰撞電壓和保留時(shí)間

 

附錄B

（資料性）

表B.1禁用水溶性合成色素的中英文名稱(chēng)、CAS號和化學(xué)分子式

 

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