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葡萄酒中_番茄交鏈孢菌毒素_交鏈孢烯_交鏈孢毒素I_鏈格孢酚單甲醚_細交鏈孢菌酮酸_交鏈孢酚_騰毒素
1、范圍
本文件規定了葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素（番茄交鏈孢菌毒素、交鏈孢烯、交鏈孢毒素I、鏈格孢酚單甲醚、細交鏈孢菌酮酸、交鏈孢酚、騰毒素）的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。本文件適用葡萄酒中7種鏈格孢霉毒素的測定和確證。
2、規范性引用文件
下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T6682分析實(shí)驗室用水規格和實(shí)驗方法
LS/T6133-2018糧油檢驗主要谷物中16種真菌毒素的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
T/AFFI038-2023葡萄干中8種真菌毒素殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法
3、術(shù)語(yǔ)和定義
本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。
4、原理
試樣經(jīng)甲酸乙腈溶液超聲提取，QuEChERS法凈化后，經(jīng)反相色譜柱分離，以保留時(shí)間定性，供高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定和確證，外標法定量。
5、試劑和材料
本方法所用的試劑，除另有規定外，均為分析純，水為GB/T6682規定的一級水。
5.1 試劑
5.1.1 乙腈：色譜純。
5.1.2 甲醇：色譜純。
5.1.3 甲酸：優(yōu)級純。
5.1.4 氯化鈉：優(yōu)級純。
5.1.5 無(wú)水硫酸鎂粉末。
5.1.6 十八烷基（C18）粉末。
5.1.7 N-丙基乙二胺（PSA）粉末。
5.1.8 1%甲酸的乙腈溶液：取1mL甲酸用乙腈定容到100mL。
5.1.9 50%乙腈溶液：取50mL乙腈和50mL水混合均勻。5.2標準品全國團體標準信息平臺
T/NAIA 0294—2024 2
5.2.1 標準品：番茄交鏈孢菌毒素（AAL，CAS號79367-52-5）、交鏈孢烯（ALT，CAS號29752-43-0）、交鏈孢毒素I（ATX-1，CAS號56258-32-3）、鏈格孢酚單甲醚（AME，CAS號26894-49-5）、細交鏈孢菌酮酸（TEA，CAS號610-88-8）、交鏈孢酚（AOH，CAS號641-38-3）、騰毒素（TEN，CAS號28540-82-1）。
5.2.2 標準儲備液（100.0μg/mL）：分別準確移取7種鏈格孢霉毒素標準物質(zhì)適量，分別用乙腈溶解并定容,配制成100.0μg/mL的標準儲備溶液，于-20°C避光貯存。
5.2.3 混合標準儲備溶液的配制：分別準確吸取7種鏈格孢霉毒素各1.0mL于10mL容量瓶中，乙腈定容至刻度，配制成10.0μg/mL的混合標準儲備液于-20°C避光貯存。
CAS號：28540-82-1，商品編號：XB06354，品牌：XBRM，型號：100μg/mL，規格：1ml
5.2.4 7種真菌毒素標準工作溶液：分別準確吸取不同體積混合標準儲備液，用空白葡萄酒基質(zhì)定容至1.0mL，配制成7種鏈格孢霉毒素的濃度分別為1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0、200.0ng/mL的系列標準工作溶液，臨用現配。
6、儀器和設備
6.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配備電噴霧離子源。
6.2 天平：感量0.1mg和0.01g。
6.3 渦旋混合器。
6.4 高速冷凍離心機：最大轉速10000r/min。
6.5 超聲波發(fā)生器。
6.6 氮吹儀。
7、分析步驟
7.1 試液的提取
稱(chēng)取10g（精確至0.01mg）混勻的葡萄酒樣品于50mL具塞離心管中,準確加入10mL含1%甲酸的乙腈溶液和5g氯化鈉，渦旋混勻，超聲提取10min，8000r/min離心5min。吸取6mL上清液加入至盛有無(wú)水硫酸鎂150mg，C18粉末50mg和N-丙基乙二胺（PSA）50mg的凈化管中，經(jīng)渦旋離心，對提取物進(jìn)行凈化處理。移取上清液2.0mL于45°C氮氣保護下吹干，用50%的乙腈溶液復溶至2.0mL，經(jīng)0.22μm有機濾膜過(guò)濾后上機測定。
7.2 儀器參考條件
7.2.1 液相色譜參考條件7.2.1.1色譜柱：C18，2.1mm×100mm，粒徑1.7μm或性能相當。
7.2.1.2 柱溫：25°C。
7.2.1.3 流動(dòng)相：A-水（含0.1%甲酸），B-甲醇；梯度洗脫見(jiàn)表1。
7.2.1.4 流速：0.25mL/min。
7.2.1.5 進(jìn)樣量：5μL。
表1流動(dòng)相及梯度洗脫條件
| 時(shí)間/min | 流速/（mL/min） | 流動(dòng)相A/% | 流動(dòng)相B/% |
| 0.00 | 0.25 | 90 | 10 |
| 1.00 | 0.25 | 85 | 15 |
| 2.00 | 0.25 | 80 | 20 |
| 8.00 | 0.25 | 40 | 60 |
| 13.00 | 0.25 | 17 | 83 |
| 15.00 | 0.25 | 5 | 95 |
| 15.10 | 0.25 | 90 | 10 |
| 18.00 | 0.25 | 90 | 10 |
7.2.2 質(zhì)譜參考條件
7.2.2.1 離子源：電噴霧離子源（ESI）。
7.2.2.2 掃描方式：正離子掃描和負離子掃描。
7.2.2.3 檢測方式：多反應監測（MRM）。
7.2.2.4 脫溶劑氣溫度：325°C。
7.2.2.5 脫溶劑氣流速：800L/Hr。
7.2.2.6 錐孔流速：150L/Hr。
7.2.2.7 定性離子對、定量離子對、碰撞能量等參數參見(jiàn)附錄A。
7.3 定量測定
根據試液中被測物含量情況，選定濃度相近的基質(zhì)標準混合使用液，基質(zhì)標準混合使用液和待測試液中被測物的響應值均應在儀器檢測的線(xiàn)性范圍內?；|(zhì)標準混合使用液與試液等體積進(jìn)樣測定。標準溶液及試液均按7.2.1和7.2.2規定的條件進(jìn)行測定，如果試液中與標準溶液相同的保留時(shí)間有峰出現，則對其進(jìn)行確證，7種鏈格孢霉毒素的參考保留時(shí)間見(jiàn)表2。7種鏈格孢霉毒素標準品的多反應監測（MRM）色譜圖參見(jiàn)附錄B，采用基質(zhì)溶液校準曲線(xiàn)外標法定量。
表2 參考保留時(shí)間
| 被測物名稱(chēng) | 保留時(shí)間/（min） |
| 番茄交鏈孢菌毒素（AAL） | 3.89 |
| 交鏈孢烯（ALT） | 4.17 |
| 交鏈孢毒素I（ATX-1） | 4.37 |
| 鏈格孢酚單甲醚（AME） | 5.87 |
| 細交鏈孢菌酮酸（TEA） | 8.13 |
| 交鏈孢酚（AOH） | 8.99 |
| 騰毒素（TEN） | 9.54 |
7.4定性測定
經(jīng)確證分析被測物質(zhì)色譜峰保留時(shí)間與標準物質(zhì)相一致，并且在扣除背景后的樣品譜圖中，所選擇的離子均出現。同時(shí)所選擇離子的豐度比與標準溶液中相關(guān)離子的相對豐度一致，相似度在允許偏差之內（見(jiàn)表3），則可判定樣品中存在對應的被測物。
表3定性確證時(shí)相對離子豐度的最大允許偏差
| 相對離子豐度 | ＞50% | ＞20%至50% | ＞10%至20% | ≤10% |
| 允許的相對偏差 | ±20% | ±25% | ±30% | ±50% |
7.5空白試驗
除不加試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。
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