一、 適用范圍

 

本文件描述了按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物質(zhì)（簡(jiǎn)稱食藥物質(zhì)）中赭曲霉毒素B的高效液相色譜-熒光檢測(cè)方法。
本文件適用于石斛、梔子、蓮子、百合、薏苡仁、茯苓和麥芽中赭曲霉毒素B含量的測(cè)定，附錄A內(nèi)其余食藥物質(zhì)可參考執(zhí)行。

 

二、 規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

 

 

三、 原理

 

采用乙腈提取液提取試樣中的赭曲霉毒素B，分散固相萃取方法凈化，高效液相色譜-熒光檢測(cè)法檢測(cè)，外標(biāo)法定量。

 

四、 試劑和材料

 

除另有規(guī)定外，所用試劑應(yīng)均為分析純，水為符合GB/T6682中規(guī)定的一級(jí)水。

 

4.1試劑

 

4.1.1  乙腈（CH3CN）：色譜純。

4.1.2  甲醇（CH3OH）：色譜純。

4.1.3  甲酸（HCOOH）：色譜純。

4.1.4  無(wú)水硫酸鎂（MgSO4）。

4.1.5  氯化鈉（NaCl）。

4.1.6  檸檬酸鈉二水合物（C6H5Na3O7·2H2O）。

4.1.7  檸檬酸氫二鈉鹽倍半水合物（C6H9NaO8）。

4.1.8  石墨化碳黑（C，GCB），60~80μm。

4.1.9  N-丙基乙二胺（C5H14N2，PSA），40~60μm。

 

4.2鹽析劑和吸附劑配比

 

4.2.1  鹽析劑：無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、檸檬酸鈉二水合物和檸檬酸氫二鈉倍半水合物，質(zhì)量比為4∶1∶1∶0.5。

4.2.2  吸附劑1：無(wú)水硫酸鎂、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，質(zhì)量比為3∶1∶1。

4.2.3  吸附劑2：無(wú)水硫酸鎂、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，質(zhì)量比為3∶1∶2。

 

4.3溶液配制

 

4.3.1  0.1%甲酸水溶液：取1mL甲酸，用水稀釋至1000mL，混勻。

4.3.2  2%甲酸乙腈溶液：取20mL甲酸，用乙腈稀釋至1000mL，混勻。

4.3.3  乙腈-甲酸-水溶液(50：0.05：49.95，V/V/V)：量取500mL乙腈，加入0.5mL甲酸（4.1.3），用水稀釋至1000mL，混勻。

 

4.4標(biāo)準(zhǔn)品

 

赭曲霉毒素B標(biāo)準(zhǔn)品（C20H19NO6，CAS：4825-86-9）：純度≥98%，或經(jīng)國(guó)家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書(shū)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。

 

4.5標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

 

4.5.1  標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（1.0mg/mL）：準(zhǔn)確稱取一定量的赭曲霉毒素B標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，-20°C下避光保存。

4.5.2  標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.0μg/mL）：準(zhǔn)確移取一定量赭曲霉毒素B標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（4.5.1），用甲醇稀釋成4μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，4°C下避光保存。

4.5.3  基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液：準(zhǔn)確移取一定量標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.5.2），用基質(zhì)空白溶液稀釋成濃度為1、2、5、10、20、50ng/mL的基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液。

 

五、儀器和設(shè)備

 

5.1   高效液相色譜儀：配熒光檢測(cè)器。

5.2   分析天平：感量分別為0.01g和0.00001g。

5.3   超聲波發(fā)生器。

5.4   高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。

5.5   恒溫氮吹裝置。

5.6   渦旋混合器。

5.7   粉碎機(jī)。

5.8   1mL一次性注射器。

5.9   濾膜：0.22μm，有機(jī)系。

5.10  離心管：50mL。

5.11  20目篩。

 

六、試樣制備與保存

 

從樣品中取出具有代表性的樣品1kg，粉碎機(jī)粉碎混勻后過(guò)20目篩，裝入潔凈的自封袋中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，-20°C保存。

 

 

七、分析步驟

 

7.1提取與凈化

 

T/CIQA50-20233稱取20g試樣（精確到0.01g），加入100mL2%甲酸乙腈（4.3.2），渦旋或振蕩30s，超聲波處理10min，8000r/min離心10min，將20mL上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，加入7.8g鹽析劑（4.2.1），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min，分別按不同類型食藥物質(zhì)作如下處理。

 

7.1.1  石斛、梔子、蓮子、百合、茯苓、麥芽的凈化將10mL上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，再加入500mg吸附劑1（4.2.2），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min

 

7.1.2  薏苡仁的凈化將10mL上清液轉(zhuǎn)移至另一離心管中，再加入600mg吸附劑2（4.2.3），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min。分別取7.1.1和7.1.2中上清液5mL，在45°C條件下，用氮?dú)獯蹈?，加?.0mL乙腈-甲酸-水溶液（4.3.3），渦旋或振蕩1min溶解殘留物，過(guò)0.22μm有機(jī)濾膜，收集濾液于進(jìn)樣瓶中，用高效液相色譜-熒光檢測(cè)法測(cè)定。

 

7.2測(cè)定

 

7.2.1  液相色譜參考條件液相色譜參考條件列出如下：a)色譜柱：C18柱，（柱長(zhǎng)150mm，柱內(nèi)徑4.6mm，填料粒徑3.5μm）或等效柱；b)檢測(cè)波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)320nm，發(fā)射波長(zhǎng)456nm；c)流動(dòng)相及洗脫條件：A：0.1%甲酸水，B：乙腈；等度洗脫：50%A-50%B；d)流速：1.0mL/min；e)柱溫：40°C；f)進(jìn)樣量：10μL。

 

7.2.2  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作以標(biāo)準(zhǔn)工作溶液濃度為橫坐標(biāo)，待測(cè)物質(zhì)的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。每次試驗(yàn)均應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。

 

7.2.3  定性測(cè)定按照保留時(shí)間進(jìn)行定性，在相同試驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)物質(zhì)的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)溶液中對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間偏差在±2.5%之內(nèi)。

 

7.2.4  定量測(cè)定按照7.2.1液相色譜條件測(cè)定樣液和標(biāo)準(zhǔn)工作液，外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法測(cè)定樣品中的待測(cè)物質(zhì)的含量，樣品中待測(cè)物質(zhì)的響應(yīng)值應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍之內(nèi)，如果超出標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再進(jìn)樣。色譜圖參見(jiàn)附錄B。全國(guó)團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)信息平臺(tái)
T/CIQA50-20234

 

7.2.5  空白試驗(yàn)除不加試樣外，均按7.1和7.2步驟進(jìn)行。

 

 

 

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