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食藥物質(zhì)中T-2和HT-2毒素的測定液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法
一、 范圍
本文件描述了按照傳統(tǒng)既是食品又是中藥材的物質(zhì)（簡稱食藥物質(zhì)）中T-2毒素（T-2）和HT-2毒素（HT-2）的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法。
本文件適用于石斛、梔子、蓮子、百合、薏苡仁、茯苓和麥芽中T-2毒素和HT-2毒素含量的測定，附錄A內(nèi)其余食藥物質(zhì)可參考執(zhí)行。
二、 規(guī)范性引用文件
下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。
GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。
三、 原理
采用乙腈水溶液提取試樣中T-2毒素和HT-2毒素，分散固相萃取方法凈化，液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法檢測，外標(biāo)法定量。
四、試劑和材料
除另有規(guī)定外，所用試劑應(yīng)均為分析純，水為符合GB/T6682規(guī)定的一級水。
4.1試劑
4.1.1 甲醇（CH3OH）：色譜純。
4.1.2 乙腈（CH3CN）：色譜純。
4.1.3 甲酸（HCOOH）：色譜純。
4.1.4 乙酸銨（CH3COONH4）：色譜純。
4.1.5 氯化鈉（NaCl）。
4.1.6 無水硫酸鎂（MgSO4）。
4.1.7 二氧化硅（SiO2）。
4.1.8 N-丙基乙二胺（C5H14N2，PSA），40~60μm。
4.1.9 C18吸附劑，40~60μm。
4.1.10 石墨化碳黑（C，GCB），60~80μm。
4.2溶液配制
4.2.1 80%乙腈溶液：量取200mL水加入到800mL乙腈中，混勻。
4.2.2 1mmol/L乙酸銨溶液（含0.1%甲酸）：稱取0.077g乙酸銨（4.1.4），加入1mL甲酸（4.1.3），用水溶解并稀釋至1000mL，混勻。
4.2.3 甲醇-甲酸-水溶液（35︰0.5︰64.5，V/V/V）：量取350mL甲醇，加入5mL甲酸（4.1.3），用水稀釋至1000mL，混勻。
4.3標(biāo)準(zhǔn)品
4.3.1 T-2標(biāo)準(zhǔn)品（C24H34O9，CAS：21259-20-1）：純度≥98%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。
4.3.2 HT-2標(biāo)準(zhǔn)品（C22H32O8，CAS：26934-87-2）：純度≥98%，或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)
4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制
4.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲備液（1.0mg/mL）：分別準(zhǔn)確稱取一定量的T-2毒素和HT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解成1mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液，-20°C下避光保存。
4.4.2 標(biāo)準(zhǔn)工作液（1.0μg/mL）：分別準(zhǔn)確移取一定量的T-2毒素和HT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)儲備液（4.4.1），用乙腈稀釋成1μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，4°C下避光保存。
4.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取一定量的T-2毒素和HT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.4.2），用甲醇-甲酸-水溶液（4.2.3）稀釋，將T-2配制成0.5、1、2、5、10、20ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，將HT-2配制成2.5、5、10、25、50、100ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。
4.4.4 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取一定量的T-2毒素和HT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)工作液（4.4.2），用基質(zhì)空白溶液稀釋，將T-2配制成0.5、1、2、5、10、20ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液，將HT-2配制成2.5、5、10、25、50、100ng/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。
五、儀器和設(shè)備
5.1 液相色譜三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀：配有電噴霧離子源（ESI）。
5.2 分析天平：感量分別為0.01g和0.00001g。
5.3 超聲波發(fā)生器。
5.4 高速離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。
5.5 恒溫氮吹裝置。
5.6 渦旋混合器。
5.7 粉碎機(jī)。
5.8 1mL一次性注射器。
5.9 濾膜：0.22μm，有機(jī)系。
5.10 離心管：50mL。
5.11 20目篩。
六、試樣制備與保存
從樣品中取出具有代表性的樣品1kg，粉碎機(jī)粉碎混勻后過20目篩，裝入潔凈的自封袋中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記，-20°C下保存。
七、分析步驟
7.1提取和凈化
稱取20g試樣（精確到0.01g），加入4g氯化鈉，再加入200mL80%乙腈（4.2.1），渦旋或振蕩30s，超聲波處理20min，使用高速離心機(jī)8000r/min離心5min，取100mL上清液用80%乙腈（4.2.1）定容至200mL后取10mL移至離心管中，分別按不同類型食藥物質(zhì)作如下處理。
7.1.1石斛、梔子、蓮子、百合、薏苡仁、麥芽的凈化向上清液中加入MgSO4240mg（4.1.6），SiO280mg（4.1.7），PSA80mg（4.1.8），C1880mg（4.1.9），GCB25mg（4.1.10），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min。
7.1.2茯苓的凈化向上清液中加入MgSO4240mg（4.1.6），SiO280mg（4.1.7），PSA80mg（4.1.8），C1880mg（4.1.9），渦旋或振蕩1min，8000r/min離心5min。分別取7.1.1和7.1.2中上清液5mL，在40°C條件下，用氮?dú)獯蹈?，加?.0mL甲醇-甲酸-水溶液（4.2.3），渦旋30s溶解殘留物，過0.22μm有機(jī)濾膜，收集濾液于進(jìn)樣瓶中，用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定。
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