漿果類水果中花青苷的測(cè)定 高效液相色譜法
1、 范圍
本文件規(guī)定了漿果類水果中花青苷測(cè)定的高效液相色譜法
本文件適用于漿果類水果中16種花青苷(附錄A)的測(cè)定,
本文件測(cè)定的16種花青苷中,矮牽牛索-3-0-葡萄糖苷和芍藥索-3-O-葡萄糖苷的線性范圍為0.5mg/L~50mg/L,其余14種花青苷的線性范圍為0.5mg/L~100mg/L;以試樣稱樣量為1g.定容體積為50mL計(jì),16種花青苷的檢出限和定量限詳見附錄A。
2、 規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款,其中,注日期的引用文件,僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件
GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
3、 定義和術(shù)語
本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。
4、 原理
漿果類水果中的花青苷經(jīng)鹽酸甲醇溶液振蕩提取,經(jīng)反相色譜柱分離,紫外一可見光檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè),以保留時(shí)間定性,外標(biāo)法定量。
5、試劑和材料
5.1 除非另有規(guī)定,本方法所用試劑均為分析純:水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水,
5.2 甲醇(CH,OH).
5.3 甲酸(HCOOH):色譜純
5.4 鹽酸(HC):36%~38%,
5.5 乙腈(CH,CN):色譜純
5.6 鹽酸甲醇溶液:6mL鹽酸(5.4)和194mL甲醇(5.2)混勻,
5.7 提取劑:50mL鹽酸甲醇溶液(5.6)和450mL甲醇(5.2)混勻.
5.8 流動(dòng)相A:50mL甲酸(5.3),用超純水定容至1000mL,
5.9 流動(dòng)相B:1000mL乙腈(5.5)
5.10 標(biāo)準(zhǔn)品:純度≥95%,或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),相關(guān)信息見附錄A
5.11 單標(biāo)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱取5.0mg.用提取劑(5.7)溶解并定容至5mL:即為1000mg/L的單標(biāo)儲(chǔ)備液,于一18儲(chǔ)存于密閉棕色玻璃瓶中,有效期6個(gè)月。
5.12 混合標(biāo)準(zhǔn)工作液:將單標(biāo)儲(chǔ)備溶液混合后.用提取劑(5.7)作為溶劑,逐級(jí)稀釋成0.5mg/L。
5.12 微孔濾膜:0.45μm:有機(jī)相:
6、儀器和設(shè)備
6.1 高效液相色譜儀:配有紫外-可見光檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。
6.2 分析天平:感量為0.01g和0.0001g:
6.3 搖床:溫度可控:轉(zhuǎn)速200 r/min.
6.4 離心機(jī):轉(zhuǎn)速不低于5000r/min:
6.5 冷凍研磨機(jī):轉(zhuǎn)速25 000r/min.
7、儀器和設(shè)備
7.1 試樣制備
果實(shí)洗凈,捩干,取可食部分200g,切碎混勻,用冷凍研磨機(jī)研成粉末。
7.2 試樣保存
試樣裝人樣品瓶中,密封,置一80條件下冷凍保存。
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