1、 范圍

 

本文件規定了農產(chǎn)品及其制品中嘌呤的高效液相色譜測定方法.本文件適用于農產(chǎn)品及其制品中嘌呤(次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤和腺嘌呤)含量的測定.

 

2、 規范性引用文件

 

下列文件中的內容通過(guò)文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款.其中,注日期的引用文件,僅該日期對應的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件.

GB/T６６８２分析實(shí)驗室用水規格和試驗方法

 

 

3、 定義和術(shù)語(yǔ)

 

本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

 

 

4、 原理

 

嘌呤化合物在高溫條件下經(jīng)三氟乙酸甲酸溶液水解形成游離態(tài)嘌呤,經(jīng)反相色譜柱分離,紫外檢測器或二極管陣列檢測器檢測,保留時(shí)間定性,外標法定量.

 

5、試劑和材料

 

除非另有說(shuō)明,本方法所用試劑均為分析純,水為GB/T６６８２規定的一級水.

 

５.１試劑

 

５.１.１氫氧化鈉(NaOH).

 

５.１.２三氟乙酸(CF3COOH).

 

５.１.３甲酸(HCOOH).

 

５.１.４磷酸(H３PO４).

 

５.１.５磷酸二氫鉀(KH２PO４):優(yōu)級純.

 

５.１.６甲醇(CH３OH):色譜純.

 

５.２溶液配制

 

５.２.１10mmol/L氫氧化鈉溶液:稱(chēng)取氫氧化鈉(５.１.１)０.０４g,用水溶解并定容至１００mL,混勻.

 

５.２.２試樣提取溶液:量取三氟乙酸(５.１.２)４５mL,甲酸(５.１.３)４５mL,加水定容至１００mL,混勻.

 

５.２.３10％磷酸溶液:取磷酸(５.１.４)１０mL,用水稀釋定容至１００mL,混勻.

 

５.２.４５mmol/L磷酸二氫鉀溶液(pH３.８):稱(chēng)取磷酸二氫鉀(５.１.５)０.９５２g,加水９００mL溶解,加水定容至１L,混勻,用磷酸溶液(５.２.３)調節pH至３.８.

 

５.３標準品

 

５.３.１次黃嘌呤(C５H４N４O,CAS號:６８Ｇ９４Ｇ０):純度≥９８％,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì).

 

５.３.２黃嘌呤(C５H４N４O２,CAS號:６９Ｇ８９Ｇ６):純度≥９８％,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì).

 

５.３.３鳥(niǎo)嘌呤(C５H５N５O,CAS號:７３Ｇ４０Ｇ５):純度≥９８％,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì).

 

５.３.４腺嘌呤(C５H５N５,CAS號:７３Ｇ２４Ｇ５):純度≥９８％,或經(jīng)國家認證并授予標準物質(zhì)證書(shū)的標準物質(zhì).

 

５.４標準溶液配制

 

５.４.１嘌呤混合標準儲備溶液:分別準確稱(chēng)取次黃嘌呤、黃嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤、腺嘌呤各１０mg(精確至０.０１mg)于燒杯中,用１０mmol/L的氫氧化鈉溶液(５.２.１)溶解并轉移至１００mL容量瓶,定容,即為１００μg/mL的嘌呤混合標準儲備溶液,標準儲備溶液于４°C保存,不超過(guò)６個(gè)月.

 

５.４.２嘌呤混合標準工作溶液:量取嘌呤混合標準儲備溶液１mL用磷酸二氫鉀溶液(５.２.４)稀釋定容至１０mL后,分別量?。?１mL、０.２mL、０.５mL、１mL、５mL、１０mL,用磷酸二氫鉀溶液(５.２.４)稀釋定容至１０mL,即得到濃度分別為０.１μg/mL、０.２μg/mL、０.５μg/mL、１μg/mL、５μg/mL、１０μg/mL的嘌呤混合標準工作液,或根據需要配制其他濃度,現用現配.

 

５.５材料

 

微孔濾膜:水相濾膜或尼龍濾膜,０.４５μm.

 

6、儀器和設備